羊產氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

使用說明書

【產品名稱】

通用名：羊產氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Alpha-Toxin gene of Clostridium Perfringens（ELISA）

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預期用途】 羊產氣莢膜梭菌病是由產氣莢膜梭菌（Clostridium Perfringens）引起的，該菌是動物生存環境中常見的一種梭菌, 它能分解有機質中的糖, 并產生大量氣體和毒素, 導致動物機體組織壞死、中毒甚至死亡。感染羊后可引起羔羊痢疾、羊猝疽、腸毒血癥等疾病，嚴重危害養羊業的發展。

本試劑用于檢測羊血清中產氣莢膜梭菌α毒素抗體，可用于羊三聯四防疫苗免疫效果評價。

【原    理】

    本試劑盒由預包被產氣莢膜梭菌α毒素蛋白抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中α毒素抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有α毒素抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有產氣莢膜梭菌α毒素抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋（如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

注：樣本稀釋比例相當于1:50。

4.混勻，蓋好蓋板膜,置37℃（推薦水浴）避光反應30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，最后一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應≤0.3，陽性對照的平均OD值即ODPC應≥0.6。

【檢驗結果的判定】

1.樣品的OD值即ODS；

2.閾值計算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；

SP值≥0.2，結果判定為陽性；SP值＜0.2，結果判定為陰性。

3.本實驗結果為陰性時表明羊只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測羊血清、血漿中產氣莢膜梭菌α毒素抗體，根據SP值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。